免疫共沉淀
服務(wù)目的:
測定兩種目的蛋白質(zhì)是否在細胞內(nèi)結(jié)合;也可用于測定確定某種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
服務(wù)原理:
以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法,當(dāng)細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x,那么與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。
服務(wù)材料:
試劑:蛋白提取試劑盒、非離子變性劑(NP-40、TritonX-100)、PBS、TBS、相應(yīng)的IgG、Protein A 或Protein G瓊脂糖凝膠珠、SDS-PAGE電泳、上樣緩沖液。
儀器:振蕩器、蛋白電泳儀、恒溫箱、脫色搖床。
服務(wù)流程:
1)用其特定蛋白的抗體與ProteinA/G相結(jié)合(Flag IP Kit已結(jié)合上);
2)用抗體成點特定蛋白,特定蛋白已結(jié)合了與其相互作用蛋白;
3)通過洗滌得到純復(fù)合蛋白后用感興趣蛋白抗體通過WB方法檢測其IP結(jié)果;
4)提交WB圖與分析結(jié)果和實驗報告。
服務(wù)方法:
1、蛋白樣品準備。收集細胞或組織,在非變性條件下裂解細胞,釋放蛋白。
2、選做去除非特異性結(jié)合。取待測樣品,選用和免疫共沉淀時使用的IgG種屬相同的普通IgG與瓊脂糖凝膠珠混合,4oC慢搖30min-2h。離心取上清。
3、免疫共沉淀。加一抗,4oC慢搖過夜。加瓊脂糖凝膠珠,4oC慢搖1~3h。瞬時離心棄上清。PBS洗沉淀5次。
4、加電泳上樣緩沖液,煮沸用于SDS-PAGE電泳。
收費標準/服務(wù)周期/提供結(jié)果:
詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務(wù)協(xié)議。
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