良好的免疫組化染色切片是正確判斷染色結(jié)果的基礎(chǔ)和前提。由于免疫組化染色過(guò)程中存在很多步驟或環(huán)節(jié)，每一個(gè)步驟或環(huán)節(jié)都可能影響到染色的終結(jié)果，因此，要做好一張高質(zhì)量的免疫組化切片并不是一件非常容易的事。需要實(shí)驗(yàn)人員不懈努力才能保證做出合格的免疫組化切片。雖然免疫組化染色可以存在各種各樣的問(wèn)題，但從染色的結(jié)果看，一般可分為兩類(lèi)：無(wú)色片(即無(wú)陽(yáng)性信號(hào))和“雜音”染色片(有陽(yáng)性信號(hào))。
 

　　染色結(jié)束后，切片中見(jiàn)不到任何陽(yáng)性信號(hào)。這是比較常見(jiàn)的現(xiàn)象，出現(xiàn)這種現(xiàn)象，有兩種可能：1、真陰性結(jié)果：整個(gè)染色過(guò)程沒(méi)有出現(xiàn)問(wèn)題，組織或細(xì)胞確實(shí)不表達(dá)與抗體相關(guān)的抗原。2、假陰性結(jié)果：即此陰性結(jié)果不是真實(shí)的反映。假陰性結(jié)果又可分為兩種情況：(1)切片中根本就不包含所預(yù)期檢查的組織或細(xì)胞。出現(xiàn)這種情況，可能是實(shí)驗(yàn)人員選擇錯(cuò)了切片或選錯(cuò)了抗體。獲得正確的切片進(jìn)行染色是獲得正確結(jié)果的前提。由此表明：制作出合格的免疫組化切片是至關(guān)重要的。(2)染色過(guò)程中的某一或某些環(huán)節(jié)出了問(wèn)題。比如，組織未進(jìn)行抗原修復(fù)，有的組織必須經(jīng)過(guò)抗原修復(fù)才能檢測(cè)抗原表達(dá)；或選用了只能用于冰凍組織而不能用于石蠟包埋組織的抗體；或一抗失效，抗體長(zhǎng)期不用和/或已超過(guò)有效期是主要的原因。也可見(jiàn)于染色過(guò)程中漏掉了某一環(huán)節(jié)，如忘記加二抗或三抗，或用了兩次二抗而缺少了三抗，或配制DAB時(shí)少了過(guò)氧化氫。為了避免這種簡(jiǎn)單的錯(cuò)誤，有一種簡(jiǎn)單的方法：在三抗孵育結(jié)束時(shí)，將切片上的三抗甩在一張白紙上，在將配制好的DAB滴一滴在白紙的三抗上，觀察是否出現(xiàn)棕色。如果出現(xiàn)了，證明三抗和DAB的配制過(guò)程沒(méi)有錯(cuò)誤。如果這種DAB再滴到切片上沒(méi)有出現(xiàn)任何陽(yáng)性信號(hào)，問(wèn)題一定是出在三抗以前。如果紙上不出現(xiàn)棕色反應(yīng)，問(wèn)題肯定在三抗或DAB的配制過(guò)程。這種簡(jiǎn)單方法能迅速的幫助我們查找出現(xiàn)問(wèn)題可能的原因。
 

　　解決陰性染色的問(wèn)題非常簡(jiǎn)單，就是設(shè)立“陽(yáng)性對(duì)照”。如果陽(yáng)性對(duì)照有了表達(dá)，說(shuō)明染色的全過(guò)程和所有試劑都沒(méi)有問(wèn)題。如果此時(shí)待測(cè)樣本仍為陰性，便是真實(shí)的陰性，說(shuō)明組織或細(xì)胞沒(méi)有相應(yīng)的抗原表達(dá)。反之，如果陽(yáng)性對(duì)照沒(méi)有著色，表明染色過(guò)程中某個(gè)或某些步驟出了問(wèn)題或試劑出了問(wèn)題。應(yīng)一一尋找原因。陽(yáng)性對(duì)照包括兩種，一種稱(chēng)為“自身對(duì)照”或“內(nèi)部對(duì)照”，這是指在測(cè)試的切片中本身就存在已知的抗原，如正常淋巴結(jié)中存在T和B細(xì)胞抗原，CD20或CD3都應(yīng)該有表達(dá)。
 

　　免疫組化標(biāo)記中與預(yù)后有關(guān)的標(biāo)記大致可分為三類(lèi)：①類(lèi)固醇激素受體：如雌激素受體、孕激素受體等，免疫組化與乳腺癌的關(guān)系已獲*，性激素受體陽(yáng)性者內(nèi)分泌治療效果較好，預(yù)后也較好。相似的結(jié)果也見(jiàn)于子宮內(nèi)膜癌和卵巢癌。②腫瘤基因標(biāo)記：如癌基因c-erB-2，c-myc，P53蛋白等，在腫瘤中高度表達(dá)者，患者預(yù)后較差；而nm23蛋白高度表達(dá)者，腫瘤轉(zhuǎn)移率較低，預(yù)后較好。③細(xì)胞增殖性標(biāo)記：如表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)、增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、Ki-67等，表達(dá)指數(shù)越高，表明其增殖越活躍，惡性度增高，預(yù)后不良，其中以惡性淋巴瘤、乳腺癌較為明顯。而且在乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)Ki-67、PCNA、EGFR陽(yáng)性者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率高，并與激素受體的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。