蛋白質(zhì)印跡法(免疫印跡試驗)即
WesternBlot。WesternBlot是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
蛋白質(zhì)印跡WesternBlot的一般認為是美國斯坦福大學(xué)的喬治·斯塔克(GeorgeStark)。在尼爾·伯奈特(NealBurnette)于1981年所著的《分析生物化學(xué)》(AnalyticalBiochemistry)中被稱為WesternBlot。蛋白免疫印跡(WesternBlot)是將電泳分離后的細胞或組織總蛋白質(zhì)從凝膠轉(zhuǎn)移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特異性抗體檢測某特定抗原的一種蛋白質(zhì)檢測技術(shù)，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用*種方法，發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。WesternBlot只要買現(xiàn)成的試劑盒就行，操作也比較簡單，原理如下(二抗用HRP標記):反應(yīng)底物為過氧化物+魯米諾，如遇到HRP，即發(fā)光，可使膠片曝光，就可洗出條帶。
免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應(yīng)抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產(chǎn)物，可通過融合部分的抗體檢測。WesternBlot是檢測單一細胞蛋白表達量的方法；若要對表達蛋白進行細胞定位，confocal應(yīng)是的方法，若要進行蛋白相互作用的關(guān)系，應(yīng)考慮免疫共沉淀技術(shù)。
